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非極性色譜柱廠家分析色譜柱常見問題集錦

  非極性色譜柱廠家談色譜柱常見問題集錦:
  1.拿到一根新柱的時候應(yīng)該怎樣進(jìn)行活化及維護(hù)?
  新柱活化,實際上是一個平衡的過程,除了用流動相平衡外,有時候還必須用所測樣品對新柱進(jìn)行平衡,特別是測定分子量比較高的多肽,尤其重要。因為分子量高的物質(zhì)分子,擴(kuò)散速度慢,平衡所需時間也相應(yīng)較長。具體平衡方式也很簡單,多進(jìn)幾次樣品,直到峰面積和保留時間穩(wěn)定,再進(jìn)行正式進(jìn)樣測定。
  如果要加快平衡時間,把前面用來平衡的進(jìn)樣樣品濃度加大,或者不等洗脫完成,連續(xù)進(jìn)樣多針。用待測物對新柱平衡,目的是將硅膠基質(zhì)填料表面具有非特異性吸附的位點的吸附能力飽和掉。
  2.非極性色譜柱的技術(shù)都有哪些?這些技術(shù)在應(yīng)用時都體現(xiàn)在哪里?
  非極性色譜柱廠家色譜柱技術(shù)包括填料技術(shù)和裝柱技術(shù),填料技術(shù)自不待言,填料的好壞對色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響。裝柱技術(shù)也沒有想象中的這么簡單,不同固定相、不同粒徑、不同柱管內(nèi)徑和長度,裝柱工藝都有所不同,要裝出緊密、穩(wěn)定、均一的柱床,更多是一門藝術(shù),需要經(jīng)驗積累。
  3.色譜柱技術(shù)的差距在哪里?
  液相色譜柱裝填實際上是有一定技巧和程序,可能還有一些運氣。一般使用高壓勻漿方法裝填。也就是能讓填料在溶劑內(nèi)均勻地懸浮。然后用瞬間高壓壓實,這實際上用到了不同比例的勻漿液體,和合適的壓力。壓力太大,顆粒破碎,壓力太小,塔板數(shù)少。同時壓力需要穩(wěn)定,不然分布不均,拖尾嚴(yán)重。同時還有頭上平整程度。套上套,就可以用了。
  4.多個樣品不好不離的時候,該怎么通過選擇合適的色譜柱來提高分離度?
  提高分離度可從三個主要影響因素來考慮,柱效、選擇性和保留因子??赏ㄟ^減小填料粒徑和增加柱長提高柱效;選擇性和固定相選擇以及pH條件有關(guān),通過選擇合適的色譜柱和合適的pH,可以提高選擇性;有時候適當(dāng)延長出峰時間增加保留因子,也可提高分離度。
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